Определение микробной загрязненности лекарственных средств

Методы определения микробной загрязненности готовых лекарственных препаратов

Имеются определенные требования ВОЗ и фармакопеи по микробной загрязненности различных лекарственных средств.

Лекарственные средства для парентерального введения в виде инъекций, глазные капли, мази, пленки, средства для новорожденных, должны быть стерильными.

Стерильные инъекционные растворы могут обладать пирогенными свойствами, т.е. вызывать повышение температуры тела. Это обусловлено наличием в них убитых бактерий или продуктов их распада. Пирогены – это сложные по своей структуре вещества, которые содержат протеины, липиды и полисахариды, и вызывают в макроорганизме комплекс изменений, характеризующихся повышением температуры тела, вазомоторными расстройствами, в тяжелых случаях – шоковым состоянием. Пирогенами являются бактериальные эндотоксины. Все растворы, предназначенные для инъекций не должны содержать пирогенов. Но освободить от них готовый продукт не удается, т.к. пирогены проходят через бактериальные фильтры и устойчивы к нагреванию.

Для этого необходимо соблюдать специальные требования при изготовлении стерильных лекарственных средств:

1) дистиллированная вода уже до стерилизации не должна содержать кишечной палочки;

2) общее количество микробов в воде не должно превышать 10 – 15 клеток на 1 мл;

3) препараты готовят в асептических условиях, пользуются стерильной посудой, соблюдают стерильность при их упаковке, после приготовления стерилизуют.

Проверку стерильности производят в боксах со строгим соблюдением правил асептики. Делают посев на тиогликолевую среду (для выявления различных бактерий, в том числе анаэробов) и посев на среду Сабуро (для выявления грибов, г.о. рода Кандида). Если нет роста микробов на средах, то препарат является стерильным.

Если лекарственное средство обладает антимикробным действием, то стерильность определяют путем мембранной фильтрации. После фильтрации исследуемого препарата фильтр делят на части и вносят для роста задержанных микроорганизмов в жидкие питательные среды. При отсутствии роста препарат считается стерильным.

Лекарственные средства, не требующие стерилизации, содержат микроорганизмы. Но их содержание не должно превышать предельно допустимых значений для различных лекарственных форм.

Источник

Методы определения микробной загрязненности готовых лекарственных препаратов.

Имеются определенные требования ВОЗ и фармакопеипо микробной загрязненности различных лекарственных средств.

Лекарственные средства для парентерального введения в виде инъекций, глазные капли, мази, пленки, средства для новорожденных, должны бытьстерильными.

Стерильные инъекционные растворы могут обладать пирогенными свойствами, т.е. вызывать повышение температуры тела. Это обусловлено наличием в них убитых бактерий или продуктов их распада. Пирогены – это сложные по своей структуре вещества, которые содержат протеины, липиды и полисахариды, и вызывают в макроорганизме комплекс изменений, характеризующихся повышением температуры тела, вазомоторными расстройствами, в тяжелых случаях – шоковым состоянием. Пирогенами являются бактериальные эндотоксины.Все растворы, предназначенные для инъекций не должны содержать пирогенов.Ноосвободитьот нихготовый продукт не удается, т.к. пирогены проходят через бактериальные фильтры и устойчивы к нагреванию.

Для этого необходимо соблюдать специальные требованияпри изготовлениистерильных лекарственных средств:

1) дистиллированная вода уже до стерилизации не должна содержать кишечной палочки;

2) общее количество микробов в воде не должно превышать 10 – 15 клеток на 1 мл;

3) препараты готовят в асептических условиях, пользуются стерильной посудой, соблюдают стерильность при их упаковке, после приготовления стерилизуют.

Проверку стерильностипроизводят в боксах со строгим соблюдением правил асептики. Делаютпосев на тиогликолевую среду(для выявления различных бактерий, в том числе анаэробов) ипосев на среду Сабуро(для выявления грибов, г.о. рода Кандида). Если нет роста микробов на средах, то препарат является стерильным.

Если лекарственное средствообладаетантимикробнымдействием, тостерильностьопределяют путеммембранной фильтрации. После фильтрации исследуемого препарата фильтр делят на части и вносят для роста задержанных микроорганизмов в жидкие питательные среды. При отсутствии роста препарат считается стерильным.

Лекарственные средства, не требующие стерилизации, содержат микроорганизмы. Но их содержание не должно превышать предельно допустимых значений для различных лекарственных форм.

Оценка микробной загрязненности нестерильных препаратов.

1) количество жизнеспособных бактерий в 1 г или 1 мл препарата;

2) количество жизнеспособных грибов в 1 г или 1 мл препарата;

3) кишечную палочку и представителей семейства энтеробактерий, синегнойную палочку и золотистого стафилококка, которые не должны присутствовать в нестерильных лекарственных средствах.

Методы определение микробной загрязненности лекарственных средств, не обладающих антимикробным действием.

От каждой серии препарата отбирают 10 проб из 10 разных упаковок, в целом не меньше 50 г или мл. На анализ берут 30 г т(мл), разделив на 3 части по 10 г (мл).

Определение общего количества бактерий и грибов. 10 г (мл) разводят в 10 раз 0,1 М раствором фосфатного буфера, доводя конечный объем до 100 мл. Делают посев по 1 мл разведенного препаратадвухслойным агаровым методомв 2 чашки Петри с МПА, содержащим 0,1% глюкозы для определения бактерий и по 1 мл в 2 чашки Петри со средой Сабуро с антибиотиками для грибов. Чашки с МПА для определения бактерий инкубируют при 37С 5 дней, а со средой Сабуро для определения грибов при 24С 5 дней. Затем подсчитывают число колоний, находят среднее арифметическое для 2-х чашек и высчитывают количество бактерий и грибов в 1г (мл) отобранного на анализ образца.

Определение бактерий семейства Enterobacteriaceae. Следующие 10 г(мл) образца вносят в 90 мл среды обогащения, перемешивают и инкубируют при 37С 24 – 48 час. При наличии роста делают пересев на среду Эндо и висмут-сульфитный агар. Инкубируют при 37С 24 – 48 час. На среде Эндо бактерии семействаEnterobacteriaceaeобразуют малиновые колонии с металлическим блеском. На висмут-сульфитном агаре – черные или зеленовато-бурые, светло-зеленые или коричневые колонии. Колонии исследуют микроскопически и выявляют грам «-» неспоровые палочки. Подозрительные колонии пересевают на скошенный в пробирках МПА с 0,1% глюкозой и инкубируют при 37С 24 час. Из каждой пробирки с чистой культурой делают пересевы на :

1) среду с глюкозой и феноловым красным ( энтеробактерии ферментируют глюкозу и среда становится желтой);

2) среду с нитратом калия (энтеробактерии восстанавливают нитраты в нитриты и не имеют фермента цитохромоксидазы).

Если в образце обнаружены грам «-» неспоровые палочки, которые дают отрицательную реакцию на цитохромоксидазу, ферментируют глюкозу и восстанавливают нитраты в нитриты, то делают вывод, что исследуемый препарат содержит бактерии семейства Enterobacteriaceae.

Определение бактерий S. aureus и P. aeruginosa. Следующие 10 г(мл) образца вносят в 90 мл накопительной среды и инкубируют при 37С 24 – 48 час. При наличии роста делают пересев петлей на чашки Петри с солевым агаром с маннитом для стафилококка и на чашки Петри со средой для идентификации синегной палочки. Инкубируют при 37С 24 – 48 час. Стафилококк на солевом агаре образует желтые колонии, окруженные желтыми зонами. При микроскопии обнаруживаются грам»+» кокки. С чистой культурой стафилококка ставят реакцию плазмокоагуляции. Для этого в пробирку с 0,5 мл разведенной (1:4) плазмой крови человека или кролика вводят петлю агаровой культуры стафилококка и инкубируют 1-24 час при 37С. Стафилококк коагулирует плазму.

P.aeruginosaна диагностической среде образует зеленые флюоресцирующие колонии. Их идентифицируют микроскопически и биохимически. Под микроскопом бнаруживают грам «-» палочки. Реакция на цитохромоксидазу положительна (бумажка с индикатором синеет).

Нормативы. В нестерильных лекарственных средствах для приема внутрь в 1 г (мл) должно быть не более 1000 бактерий и 100 дрожжевых и плесневых грибов, а также должны отсутствовать патогенные и условно-патогенные микроорганизмы — представители семейства энтеробактерий, синегнойная палочка и золотистый стафилококк.

Лекарственные средства для местного применения (полость уха, носа, интравагинально) не должны содержать более 100 (суммарно) микробных клеток в 1 г (мл).

В таблетированных препаратах не должно быть патогенной микрофлоры, а общая обсемененность не должна превышать 10 тыс. микробных клеток на 1 таблетку.

Бактериологический контроль соблюдения санитарно-гигиенического режимаизготовления лекарственных препаратов на предприятиях и в аптеках осуществляется исследованиями смывов с рук персонала, посуды, поверхности столов, оборудования. Смывы высевают на различные питательные среды и определяют общую микробную обсемененность, наличие кишечной палочки, золотистого стафилококка, патогенных энтеробактерий, грибов рода Сandida, энтеровирусов.

Источник

Определение микробной загрязненности лекарственных средств, не обладающих антимикробным действием

Отбор проб. От каждой серии препарата (независимо от ее объема) отбирают пробу не менее чем 50 г или 50 мл, состоящую из 10 равных проб, взятых не менее чем из 10 разных упаковок.

Приготовление образца для анализа. 10 г или 10 мл препарата разводят стерильно 0,1 М фос-фатным буфером рН 7,0 или соответствующей питательной средой, доводя конечный объем до 100 мл. При разведении мягких лекарственных форм приготавливают эмульсию препарата. С этой целью 10 г препарата, 10 г твина-80 и 80 мл 0,1 М фосфатного буфера рН 7,0 вносят в колбу со стеклянными бусами (разведение 1 : 10). Твин-80 и буферный раствор перед употреблением нагревают до 40—45°С. Колбу встряхивают 5 мин на водя- ной бане при 40—45°С до получения гомогенной эмульсии.

Питательные среды. МПА с 0,1% глюкозы; агар Сабуро с антибиотиками (100 мг бензилиеницилли- на или 50 мг левомидетина на 1000 мл среды); среды обогащения для бактерий семейства Enterobacteriaceae; агар Эндо, висмут-сульфитный агар; среда с феноловым красным для идентификации бактерий семейства Enterobacteriaceae; среда с нитратом калия; среда обогащения для S. aureus и P. aeruginosa; среда для выявления пигмента P. aeruginosa; солевой агар с маннитом для идентификации S. aureus.

При испытании на микробную загрязненность лекарственных средств определяют общее количество бактерий, количество дрожжевых и плесневых грибов, наличие бактерий семейства Enterobacteriaceae, видов: Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa.

Определение общего количества бактерий. 1 мл препарата, разведенного 1 : 10, вносят в каждую из двух пробирок с 4 мл расплавленного и охлажденного до 45— 50°С МПА с 0,1% глюкозы. Быстро перемешивают и выливают в каждую из двух чашек Петри с 15—20 мл этой же среды, предварительно разлитой и застывшей. Быстрым покачиванием чашки равномерно распределяют верхний слой и дают ему застыть.

Определение общего количества грибов. Испытание проводят двухслойным агаровым методом, описанным выше, используя среду Сабуро с антибиотиками. Посевы инкубируют при 24°С 5 сут.

Определение бактерий семейства Enterobacteriaceae. 10 г (мл) образца вносят в 90 мл среды обогащения для бактерий семейства Enterobacteriaceae, перемешивают и инкубируют при 37°С 24—48 ч. При наличии роста делают пересевы петлей на среду Эндо и висмут-сульфитный агар. Инкубируют при 37°С 24—48 ч. На среде Эндо бактерии семейства Enterobacteriaceae образуют крупные малиновые колонии с металлическим блеском или без блеска; розовые, бесцветные, блестящие, выпуклые, диаметром 2—4 мм. На висмут-сульфитном агаре колонии черные с характерным металлическим блеском, среда под колониями окрашена в черный цвет или колонии зеленовато-бурые, светло-зеленые, коричневые и т. п. Под микроскопом — грамотрицательные неспоровые палочки. Подозрительные колонии пересевают (каждую отдельно) на скошенный в пробирках МПА с 0,1% глюкозы и выращивают при 37°С 24 ч. Из каждой пробирки с чистой культурой делают пересевы на среды для идентификации энтеробактерий: а) среда с глюкозой и феноловым красным и б) среда с нитратом калия. Энтеробактерии ферментируют глюкозу, среда при этом из красной становится желтой. Они способны восстанавливать нитраты в нитриты и не имеют фермента цитохромоксидазы (см. тему 5). Если в образце обнаружены грамотрицательные неспоровые палочки, которые дают отрицательную реакцию на цитохромоксидазу, ферментируют глюкозу и восстанавливают нитраты в нитриты, исследуемый препарат содержит бактерии семейства Enterobacteriaceae.

Источник